В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от 27.06.2014 года № 14.575.21.0038 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014 - 2020 годы» на этапе №1 в период с 27.06.2014 по 31.12.2014 выполнялись следующие работы:
1 Аналитический обзор современной научно-технической, нормативной и методической литературы.
2 Обоснование направления исследований и способы решения поставленных задач.
3 Проведение сравнительной оценки вариантов возможных решений исследуемой проблемы с учетом результатов прогнозных исследований, проводившихся по разработке способов лечения злокачественных опухолей центральной нервной системы (ЦНС).
4 Разработка экспериментальной модели неопластического процесса посредством имплантации опухолевых клеток в головной мозг экспериментальных животных.
5 Разработка лабораторных технологий изучения процессов противооопухолевого взаимодействия клеток in vitro.
6 Разработка лабораторных технологий изучения процессов направленной миграции гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) к опухоли в мозге экспериментальных животных in vivo.
7 Проведение патентных исследований.
8 Разработка методов сравнительного протеомного картирования и профилирования нейральной стволовой клетки, мультипотентной мезенхимальной стромальной и опухолевой стволовой клетки глиобластомы человека.
9 Выполнение серии экспериментов сравнительного протеомного картирования и профилирования лизатов.
При этом были получены следующие результаты
Выполнен аналитический обзор литературы, обоснованы направления исследований и способы решения поставленных задач, проведена сравнительная оценка вариантов возможных решений исследуемой проблемы с учетом результатов прогнозных исследований, проводившихся по разработке способов лечения злокачественных опухолей центральной нервной системы. Результат представлены в виде статьи в международном научно-аналитическом журнале «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины» 2014 г., Том 158, № 12., C.762 - 769.
Имплантация 2×105– 2 ×106 клеток (фенотипа CD 133+ не менее 45%) глиомы С6 в мозг крыс линии позволяет получить стандартную и воспроизводимую модель МГБ человека. Магнитно-резонансная томография выявляет неопластический узел окруженный зоной перифокального отека и участками кровоизлияний. Опухоль характеризуется инвазивным ростом, ангиогенезом, атипией и ангиоцентрической группировкой опухолевых клеток (ОК), общей и местной реакцией микро и макроглии, быстрым формированиев очагов некроза. Средняя продолжительность жизни животных составляет 37,23± 4,22дня с момента операции, за 30 дней наблюдений опухоль в тиридцать раз увеличивает свой объем. Разработанная модель наиболее полно соответствует мультиформной глиобластоме человека (п.4 ПГ).
Разработана лабораторная технология изучения процессов противоопухолевого взаимодействия между гемопоэтическими стволовыми клетками (ГСК) и ОК in vitro. Установлено, что протеомный обмен между ГСК и ОК тормозит репликацию ОК и отодвигает фазу логарифмического роста. Стратегически важным условием противоопухолевого действия ГСК является их численное преимущество над ОК (п.5 ПГ).
Разработаны лабораторные технологии изучения процессов направленной миграции ГСК в опухолевый очаг в мозге крыс in vivo. Установлено, что ГСК мигрируют в опухоль проникая в кровеносные сосуды. ГСК введенные в мозг животного с глиомой С6 скапливаются в желудочках мозга, в непосредственной близости от герминативных зон, проникают кровеносное русло достигают пораженной гемисферы, где распределяются вдоль границ с опухолью. ГСК введенные в системный кровоток быстро достигают опухоли и распределяются в ней взаимодействуя с ОК (п. 6 ПГ).
Патентные исследования выполнены в полном соответствии с регламентом. Проанализировано 196 источников научной информации и 322 научные публикации. Показано, что разработки биомедицинских клеточных препаратов для лечения опухолей мозга, в частности на основе ГСК, активно ведутся в 13 странах мира, особой активностью по патентованию технических решений в исследуемой области отличаются США и Россия. Однако вклад в разработку данного направления отечественных заявителей незначителен, несмотря на актуальность и перспективность исследуемого направления, которые подтверждаются как динамикой патентования охраноспособных технических решений по годам, так и ростом научных публикаций. Исследуемая тематика является охраноспосособной, имеет в РФ хорошую перспективу и будет активно развиваться в ближайшие годы (п.7 ПГ).
Разработаны методы и проведено протеомное картирование, инвентаризация, профилирование и предварительный биоинформационный анализ лизатов белков нейральных (CD 133+) стволовых клеток (НСК), выделенных из обонятельной выстилки носа человека, мультипотентных мехенхимальных (CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, СD34–) стромальных клеток (ММСК), полученных из костного мозга человека и опухолевых (CD133+) стволовых клеток (ОСК) глиобластомы человека линии U87. Идентифицированы 1664 белка в изученных лизатах стволовых клеток (СК), из которых 1052 белка (63,2%) идентичны в НСК и ОСК и 607 белков (36,47%) подобны в ММСК и ОСК. Остальные белки в ОСК глиобластомы U87 являются онкоспецифичными или связанны с процессами канцерогенеза. Для белков, присутствующих во всех трех протеомах, с помощью международных баз данных проведено аннотирование биологических процессов, молекулярных функций, клеточной локализации и сигнальных путей белков. Выявили, что в глиомасферах глиобластомы линии U87 только 10 внутриклеточных путей сигнальной трансдукции (ВКПСТ) практически не изменены неопластическим процессом, но только 2 из них (путь интегринов и путь фокальной адгезии) доступны для регуляторного воздействия на гены-кандидаты в ядре ОСК. Мембранные белки, неизменных канцерогенезом ВКПСТ и гены экспрессирующие белки этих путей в ОСК глиобластомы линии U87 могут рассматриваться в качестве основных целей и мишеней для таргетного воздействия на ОСК (п.8 - 9 ПГ).
Впервые, на собственном экспериментальном материале показано, что содержание ОК клеток CD 133+ фенотипа в культуре имплантируемых ОК является более важным параметром, при моделировании опухолей, чем общее число вводимых ОК. Впервые, с использованием методов лазерной мультифотонной микроскопии, методов автоматизированного культивирования и мониторинга количества ОК in vitro показан основной механизм противоопухолевого действия ГСК и продемонстрированы их противоопухолевые свойства in vitro. Указанная технология может быть использована при проведении доклинической оценки эффективности противоопухолевых клеточных препаратов (патентная заявка от 05.12.2014 вход. № 079164, регистрационный № 2014149234). Кроме того, получено положительное решение о выдаче патента по ранее поданной патентной заявке (№ 2012156017/10(088629) от 23.09.2014). Впервые изучены особенности миграции ГСК в организме животного с опухолью. Впервые в мировой практике созданы протеомные карты здоровых НСК, и ММСК человека и ОСК глиобластомы человека линии U87. Впервые в мировой практике создана матрица подобия здоровых стволовых и опухолевых клеток. Идентифицировано 2 пути внутриклеточной сигнальной трансдукции доступные для регуляторного воздействия на гены-кандидаты в ядре ОСК. По результатам работ опубликовано 2 статьи в журналах Web of Science (Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, Cell transplantation (IF4,44)), 1 статья направленна в журнал входящий Web of Science (принято к публикации Oncology letters), две стати направленны в Российский биотерапевтический журнал.
Полученные результаты соответствуют техническим требованиям, предъявляемым к результатам проекта. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по соглашению на отчетном этапе исполненными надлежащим образом.
В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от 27.06.2014 года № 14.575.21.0038 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014 - 2020 годы» на этапе №2 в период с 01.01.2015 по 31.06.2015 выполнялись следующие работы:
При этом были получены следующие результаты
Установлено, что источником цитокинов регулирующих процессы направленной миграции стволовых клеток могут быть непосредственно опухолевые клетки. Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) направленно мигрируют в опухоль и способны воздействовать на опухолевые клетки инфильтрирующие паренхиму мозга. Адгезия ГСК к поверхности неопластических клеток является необходимым условием противоопухолевого межклеточного взаимодействия и логическим смыслом направленной миграции.
Разработана методика маркирования ГСК и опухолевых клеток флуорохромным красителем.
Установлены механизмы взаимодействия ГСК с клетками рака лёгких и молочной железы: секреция регуляторных белков, запускающих в раковых клетках апоптоз по митохондриальному пути. Установлен механизм противоопухолевого действия ГСК в отношении клеток глиобластомы: активизация рецепторных белков клеточной поверхности. Установлены мишени для воздействия ГСК на опухолевые стволовые клетки глиобластомы U87: сигнальные пути интегринов и фокальной адгезии.
Впервые получена и апробирована модель эпителиально-мезенхимального перехода для линии клеток U87 глиобластомы человека. Впервые, разработана масс-спектрометрическая методология картирования протеома линий опухолевых клеток U87. Получены протеомные карты с указанными на них статистически значимыми изменениями в уровнях экспрессии белков после обработки клеток TGF-β. Впервые изучены молекулярные механизмы действия TGF-β на активацию эпителиально-мезенхимального перехода в клетках глиобластомы человека. Выявлены внутриклеточные сигнальные пути, ответственные за участие TGF-β в онкогенезе злокачественных глиом и установлены важные закономерности. Впервые обнаружены кандидатные маркеры метастазирования глиобластомы и потенциальные мишени для терапии этого заболевания.
Изучены процессы миграции ГСК in vivo: доказано, что 74,52% введённых ГСК направленно мигрируют в полушарие мозга с опухолью. Разработаны методы изучения биоинформационной роли ГСК в неопластическом очаге in vivo и in vitro: доказано, что ГСК с индуцированным апоптозом достоверно подавляют рост глиомы С6 и вызывают их гибель путём апоптоза по митохондриальному сигнальному пути.
По результатам работ опубликована одна статья в научном журнале, индексируемом в базе данных Web of Science. Две кандидатские диссертации сданы в Диссертационные советы. Состав выполненных работ удовлетворяет условиям Соглашения о предоставлении субсидии, в том числе Техническому заданию и Плану-графику исполнения обязательств. Результаты выполненных работ соответствует требованиям Технического задания и нормативной документации.
Впервые установленно, что источником цитокинов регулирующих процессы направленной миграции стволовых клеток могут быть непосредственно опухолевые клетки. Данный факт позволяет рассматривать феномен направленной миграции как важный регуляторно- саногенетический механизм. Нарушения в работе которого являются необходимым условием для запуска процессов канцерогенеза.
Впервые установлены механизмы взаимодействия ГСК с клетками рака лёгких и молочной железы: секреция регуляторных белков, запускающих в раковых клетках апоптоз по митохондриальному пути. Установлен механизм противоопухолевого действия ГСК в отношении клеток глиобластомы: активизация рецепторных белков клеточной поверхности. Установлены мишени для воздействия ГСК на опухолевые стволовые клетки глиобластомы U87: сигнальные пути интегринов и фокальной адгезии.
Впервые в мировой экспериментальной медицине получена и апробирована модель эпителиально-мезенхимального перехода для линии клеток U87 глиобластомы человека. Впервые, разработана масс-спектрометрическая методология картирования протеома линий опухолевых клеток U87. Впервые, получены протеомные карты с указанными на них статистически значимыми изменениями в уровнях экспрессии белков после обработки клеток TGF-β. Изучены молекулярные механизмы действия TGF-β на активацию эпителиально-мезенхимального перехода в клетках глиобластомы человека. Выявлены внутриклеточные сигнальные пути, ответственные за участие TGF-β в онкогенезе злокачественных глиом и установлены важные закономерности. Обнаружены кандидатные маркеры метастазирования глиабластомы и потенциальные мишени для терапии этого заболевания. Впервые, с позиций постгеномных технологий обоснована роль трансформирующего фактора роста β в онкогенезе мультиформной глиобластомы.
Впервые доказано, что 74,52% ГСК направленно мигрируют в полушарие мозга с опухолью. Доказано, что ГСК с индуцированным апоптозом достоверно подавляют рост глиомы С6 и вызывают их гибель путём апоптоза по митохондриальному сигнальному пути. Впервые, предложены методы оценки in vivo противоопухолевой эффективности биомедицинских препаратов на основе стволовых клеток с ремоделированным транскриптомом.
Полученные результаты соответствуют техническим требованиям, предъявляемым к результатам проекта. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по соглашению на отчетном этапе исполненными надлежащим образом.
Результаты протеомного картирования клеток линии U87 глиобластомы человека до и после воздействия трансформирующим фактором роста 1 бетта (Supplement 1, Supplement 2)
Results proteomic mapping of U87 glioblastoma cell line human before and after exposure to transforming growth factor beta 1 (Supplement 1, Supplement 2)
В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от 27.06.2014 года № 14.575.21.0038 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014 - 2020 годы» на этапе №3 в период с 01.07.2015 по 31.12.2015 выполнялись следующие работы:
При этом были получены следующие результаты
Проведено аннотирование биологических процессов, молекулярных функций, клеточной локализации и сигнальных путей для белков присутствующих в протеомах лизатов глиомасфер опухолевых стволовых (СD 133+) клеток линии U87 глиобластомы человека, нейральных (СD 133+) стволовых клеток и мезенхимальных (CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, СD34–) стволовых клеток человека. Идентифицировано 1664 белка (протеомная карта прилагается) в изученных лизатах стволовых клеток, из которых 1052 белка (63,2%) идентичны в НСК и ОСК и 607 белков (36,47%) подобны в МСК и ОСК. Остальные белки в ОСК линии U87 глиобластомы представляют собой видоспецифичную неопластическую протеомную структуру и связанны с процессами канцерогенеза. Проведен поиск мембранных белков – мишеней связанных с внутриклеточными путями сигнальной трансдукции в ОСК не пострадавших в процессе канцерогенеза. Установлено, НСК и МСК способны секретировать лиганды воздействующие на сигнальные пути имеющие домен в ядре ОСК. В глиомасферах глиобластомы линии U87 идентифицированно только 2 сигнальных пути (путь интегринов и путь фокальной адгезии) доступных для регуляторного воздействия на гены-кандидаты в ядре ОСК.
Разработаны методы сравнительного протеомного картирования и профилирования и проведено протеомное картирование и профилирования ОСК аденокарциномы молочной железы и легких человека. Созданы протеомные карты клеток линии МСА-7 рака молочной железы и А-549 рака легкого человека.
Доказано, что ГСК с индуцированным апоптозом достоверно подавляют рост глиомы С6 и вызывают их гибель путём апоптоза. Впервые, предложены методы оценки in vivo противоопухолевой эффективности биомедицинских препаратов на основе стволовых клеток. Впервые установлены механизмы взаимодействия ГСК с клетками рака лёгких и молочной железы: секреция регуляторных белков, запускающих в раковых клетках апоптоз. Установлен механизм противоопухолевого действия ГСК в отношении клеток глиобластомы: активизация рецепторных белков клеточной поверхности.
Исследованы возможности и изучены специфические механизмы противоопухолевого действия препарата ГСК in vivo на моделях животных с первичными и метастатическими опухолями головного мозга; изучены ключевые закономерности взаимодействия гемопоэтических стволовых клеток с клетками глиальных опухолей in vivo. Установлено, что ГСК адгезируют к поверхности клеток глиальных опухолей и взаимодействуют с ними. В ходе межклеточной коммуникации наблюдается феномен переноса цитоплазматического содержимого из ГСК в опухолевые клетки. В этот процесс вовлечено 31,78±7,5% клеток линии С6 и только 17,4±7,9% культуры сепарированных опухолевых стволовых клеток иммунофенотипа CD 133+ линии U87 глиобластомы. Данный феномен сопровождается замедлением темпов пролиферации опухолевых клеток, при этом выраженность цитостатического эффекта возрастает при увеличении числа ГСК. Обработка гемопоэтических (CD34+) стволовых клеток в растворе 0,005 мкмоль/л фаскаплизина позволяет получить культуру стволовых клеток с индуцированным апоптозом. При совместном культивировании с клетками глиомы С6, предобработанные в растворе фаскаплизина ГСК адгезируют к опухолевым клеткам, и взаимодействуют с ними. Запуск апоптоза в ГСК способствует уничтожению 68,4±12,4% популяции клеток глиомы С6.
Проведены работы in vivo по изучению возможностей использования биомедицинского клеточного препарата для лечения метастатических опухолей на модели аденокарциномы легкого у крыс и аденокарциномы молочной железы у мышей. Две статьи опубликовано в журналах входящих в базы Scopus и Web of Science, две статьи приняты к публикации. Защищена одна кандидатская диссертация и еще одна передана в Диссертационный Совет.
2. Научная новизна полученных результатов
Впервые, на собственном экспериментальном материале установлены фундаментальные закономерности феномена миграции стволовых в опухолевый очаг. Доказанно, что нейральные и гемопоэтические стволовые клетки обладают лучшей подвижностью в отношении опухолевых стволовых клеток МГБ. Установлено in vivo, что стволовые клетки направленно мигрируют в опухоль и накапливаются в участках инвазивного роста и зонах некроза опухолевой ткани, вектор миграционной активности более выражен между клеткам, имеющими единый гистогенетический источник. При отсутствии опухоли, НСК мигрируют в герминативные зоны мозга, а ГСК не имеют единой цели миграции в организме интактных животных.
Впервые в мировой практике проведено протеомное картирование и профилирование белков лизатов глиомасфер опухолевых стволовых (СD 133+) клеток линии U87 глиобластомы человека, нейральных (СD 133+) стволовых клеток и мезенхимальных (CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, СD34–) стволовых клеток человека. Идентифицировано 1664 белка в изученных лизатах стволовых клеток, из которых 1052 белка (63,2%) идентичны в НСК и ОСК и 607 белков (36,47%) подобны в МСК и ОСК. Остальные белки в ОСК линии U87 глиобластомы представляют собой видоспецифичную неопластическую протемноую структуру и связаннуы с процессами канцерогенеза. Проведен поиск мембранных белков – мишеней связанных с внутриклеточными путями сигнальной трансдукции в ОСК не пострадавших в процессе канцерогенеза. Диагностированно 22 пути сигнальных пути применимые для регуляции функций ОСК, которые могут рассматриваться в качестве мишеней для таргетного воздействия. Установлено, НСК и МСК способны секретировать лиганды воздействующие на 9 сигнальных путей имеющих домен в ядре ОСК: пути активации Т и В клеток, пути воспаления опосредованного хемокинами и цитокинами, пути гликолиза, пути ангиогенеза, пути VEGF, FGF и IGF. Интегриновый сигнальный путь наиболее пригоден для целенаправленного регуляторного воздействия на эффекторные функции ОСК.
Доказано, что ГСК при со-культивировании in vitro адгезируют к поверхности опухолевых клеток. В процессе взаимодействия наблюдается переноса цитоплазматического содержимого из ГСК в опухолевые клетки, что сопровождается замедлением темпов пролиферации опухолевых клеток, выраженность цитостатического эффекта возрастает по мере увеличения числа ГСК. Доказано, что взаимодействуя с клетками глиомы С6 в опухолевом очаге in vivo гемопоэтические стволовые клетки регулируют ключевые жизненные функции неопластических клеток. Стратегическим направлением дифференцировки ГСК в очаге является трансформация микроглииоциты.
Впервые, с использованием постгеномных технологий изучены механизмы генерации новых субпопуляций мезенхимального субтипа ОСК, наиболее резистентных к облучению и химиотерапии. Предложено новое противоопухолевое вещество, эффективность которого in vitro превосходит темозоламид. Доказано, что выраженность противоопухолевого эффекта фаскаплизина зависит от времени экспозиции и дозы вещества. Доказано, что в концентрации 0,005 мкмоль/л фаскаплизин оказывает цитостатическое действие, которое c увеличением времени сменяется цитотоксическим. Установлено, что основным механизмом гибели клеток глиомы является апоптоз. Обработка ГСК фаскаплизином позволяет получить культуру клеток с индуцированным апоптозом. Доказано, что трансплантация ГСК после комплекса стандартной терапии увеличивает выживаемость крыс с глиомой С6. Применение стволовых клеток с индуцированным апоптозом вызывает гибель опухолевых клеток, блокирует локальную трансмиссию TGF-1β в опухолевом очаге и повышает выживаемость экспериментальных животных.
3. Оценка соответствия полученных результатов техническим требованиям к выполненному проекту и перспектив продолжения работ по проекту
Полученные результаты соответствуют техническим требованиям, предъявляемым к результатам проекта. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по соглашению на отчетном этапе исполненными надлежащим образом.
Таблица сравнения протеомных профилей клеточных линий нейрональных и мезенхимальных стволовых клеток и опухолевых стволовых клеток линии U87 глиобластомы человека (Протеомная карта)
В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от 27.06.2014 года № 14.575.21.0038 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014 - 2020 годы» на этапе IV в период с 01.01.2016 по 31.06.2016 выполнялись следующие работы:
При этом были получены следующие результаты
1) Краткое описание основных результатов:
Разработана стратегия и алгоритм применения биомедицинского клеточного препарата (БМКП) в комплексной терапии глиобластомы у экспериментальных животных. За основную опорную точку принят объем опухоли менее 100 мм3, что является абсолютно необходимым условием исследования, позволяет обосновать целесообразность применения биомедицинских клеточных препаратов (БМКП) ГСК с модифицированным протеомом, и показания к его применению. При наличии в мозге животного опухоли более 100 мм3, целесообразно перейти к комбинированной терапии с применением химиорадиотерапии, культур нативных ГСК и дендритных вакцин. Показано, что эффективность применения БМКП в эксперименте сопоставима с ЛТ+ХТ терапией. В группе крыс с глиобластомой получавших комплексную терапию (ЛТ + ХТ + БМКП) отмечен минимальный объем опухоли (98,7±6 мм3), а выживаемость составила 45,3± 5 сут, что достоверно (P< 0,05) больше контроля 28,2± 9,2 сут, а также животных получивших только БМКП или химиорадиотерапию.
Обязательным этапом лечения является создание биопаспорта опухоли и применение ХТ и ЛТ в индивидуализированных на ИЛОК дозах, с обязательным протезированием нарушенных функций с использованием противоопухолевых вакцин. Обязательным этапам создания персонификации терапии ЗНО головного мозга является сравнительное протеомное картирование, профилирование и биоинформационный анализ ОСК/ НСК/ МСК. Первичной оптимальной дозой клеточного препарата для ЦРТ является 3 × 105 клеток, которые применяются для воздействия на ВПСТ фокальной адгезии и TGF-1β в ОСК, в сочетании с культурой ДВ, получаемой на основе МНК иммобилизуемых из системного кровотока, в количестве 15×106.
Производных фаскаплизина 12, 13-Дигидро-9-йод- 13-оксопиридо[1,2-a:3,4-b′]]дииндол-5-иум бромид) и 3-Бром-12, 13-дигидро-13-оксопиридо[1,2-a:3,4-b′]] дииндол-5-иум бромид обладают высокой цитотоксической активностью в отношении клеток линии С6. При этом 3-Бром-12, 13-дигидро-13-оксопиридо[1,2-a:3,4-b′]] дииндол-5-иум бромид характеризуется выраженным цитотоксическим действием в отношении CD 133+ клеток линии U87 глиобластомы, что позволяет считать это соединение оптимальным терапевтическим агентом, применимым для адресной доставки в неопластическую ткань и воздействия на ОСК. Разработанны клинические рекомендации и методы и алгоритмы применения БМКП в структуре лечения больных ЗНО головного мозга.
2) Оценка элементов новизны научных, конструкторских и технологических решений, информация о полученных за отчетный период охраноспособных РИД
Впервые разработана и обоснована стратегия и алгоритм применения БМКП в терапии глиальных опухолей у экспериментальных животных, и показана перспективность этого метода как экспериментальной платформы для создания новых способов лечения в нейроонкологии. Впервые, на собственном экспериментальном материале показана эффективность применения БМКП в комбинированной (ЛТ+ХТ) и комплексной терапии глиом головного мозга. Разработаны принципы персонификации биотерапии опухолей и указанно на необходимость создание биопаспорта опухоли, целесообразности ведения индивидуальной линии опухолевых клеток. Обоснована необходимость сравнительного протеомного картирования, ОСК/ НСК/ МСК, и необходимость биоинформационного анализа протеомов, предложена методика такого анализа. Показана возможность создания культур ГСК воздействующего на данные типы мишеней и полученны образцы таких культур. Установлено впервые, что оптимальной дозой клеточного препарата для циторегуляторной терапии является 3 × 105(десять в пятой) клеток, которые применяются для воздействия на ВПСТ фокальной адгезии и TGF-1β в ОСК, в сочетании с дендритными вакцинами, получаемыми на основе мнононуклеарных клеток, иммобилизуемых из системного кровотока, в количестве 15×106(десять в шестой). Предложены новые противоопухолевые агенты для доставки в опухолевый очаг, производных фаскаплизина 12, 13-Дигидро-9-йод- 13-оксопиридо[1,2-a:3,4-b′]]дииндол-5-иум бромид) и 3-Бром-12, 13-дигидро-13-оксопиридо[1,2-a:3,4-b′]] дииндол-5-иум бромид. Данные вещества обладают высокой цитотоксической активностью в отношении клеток глиальных опухолей, при этом 3-Бром-12, 13-дигидро-13-оксопиридо[1,2-a:3,4-b′]] дииндол-5-иум бромид характеризуется выраженным цитотоксическим действием в отношении CD 133+ клеток линии U87 глиобластомы, что позволяет считать это соединение оптимальным терапевтическим агентом, применимым для адресной доставки в неопластическую ткань и воздействия на ОСК. Разработаны клинические рекомендации и методы и алгоритмы применения БМКП в структуре лечения больных ЗНО головного мозга.
3) Оценка соответствия полученных результатов техническим требованиям к выполненному проекту и перспектив продолжения работ по проекту
Полученные результаты соответствуют техническим требованиям, предъявляемым к результатам проекта. Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по соглашению на отчетном этапе исполненными надлежащим образом.